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南京诺唯赞生物科技有限公司

主要产品为分子生物学、细胞生物学科研试剂,包括PCR,、荧光定量PCR、分子克隆、细...

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面对污染,坚决Say NO!Vazyme一步法RT-qPCR防污染新品隆重上市!
发布时间:2015-01-20        浏览次数:289        返回列表

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 面对城市空气污染,我们毫无防备的遭受伤害。

面对污染,我们的样品变的越来越脆弱。

面对污染,我们要坚决Say NO!

Vazyme 为此保驾护航,隆重推出 Hiscript® II U+ One Step RT-qPCR Probe Kit

—— 无缝衔接dUTP/UDG防污染系统与一步法RT-qPCR

 

·有效控制PCR扩增产物污染

·比例优化的dUTP/dNTP mix,保障扩增灵敏度 
dUTP/UDG 防污染系统是一种非常有效的控制PCR扩增产物污染的手段。在以DNA为模板的PCR检测试剂中,已逐渐成为了一种强制标准。不过,常用的E. coli UDG在通常的逆转录温度 (42-55℃) 下仍具有较高的活性,会降解cDNA,导致One Step RT-PCR/qPCR的灵敏度降低。Hiscript® II U+One Step RT-qPCR Probe Kit含有比例优化的dUTP/dNTP mix,并加入了来源于嗜冷海洋细菌的Heat-labile UDG。如Fig 3所示,Heat-labile UDG在室温下具有很高的活性,在反应体系混合过程中即可充分降解含U的双链DNA污染物。当反应体系升温至50-55 ℃ (Hiscript® II的最适反应温度) 时,Heat-labile UDG迅速彻底失活,维持cDNA的完整性,从而保证one step RT-qPCR的检测灵敏度不受影响。

图1为 Hiscript® II U+ One Step qRT-PCRProbe Kit 工作原理。 
 


图2. 以Hela细胞总RNA为模板,用Hiscript®II U+ One Step qRT-PCR Probe Kit (Q223) 扩增RFLPO (a) 及TBP基因 (b)。由图可见,优化的dUTP浓度以及Heat-labile UDG使得扩增效率和灵敏度不会受到影响。相比之下,E.coli来源的UDG会严重影响one step RT-qPCR的检测灵敏度。 
 


Hiscript II One StepRT-PCR 系列

One Tube One Step

·基于高性能的Hiscript II逆转录酶和ChampagneTaq antibody

·完整的解决方案:探针法qPCR/SYBR Green法qPCR/终点法PCR

·RT-qPCR Probe Kit提供极高的灵敏度,支持多重0探针检测

·RT-qPCR Probe U+ Kit引入UNG防污染系统,并且不会牺牲扩增灵敏度

·RT-qPCR SYBR Green Kit提供高特异性,快速的定量检测

·RT-PCR Kit具有极高的扩增效率,可扩增长达12kb的片段 
 

Hiscript® II One Step RT-PCR 系列产品涵盖了所有常见的检测手段,如荧光探针法RT-qPCR,SYBR®Green法,RT-qPCR, 终点法RT-PCR。Hiscript® II One Step RT-PCR系列产品以耐热、高效率的Hiscript® II逆转录酶以及抗体法热启动ChampagneTMTaq酶为核心,加上充分优化的缓冲体系,可以实现在闭管条件下对RNA模板的快速、高灵敏、高特异性扩增,非常适合于RNA病毒的临床检测。

 

Hiscript® II One Step RT-qPCR probe Kit

——提供最高的检测灵敏度 
 

低拷贝数模板或弱阳性样本的检出率仍然是临床诊断的挑战之一。Hiscript® II One Step RT-qPCR Probe Kit含有最佳比例的Hiscript® II reverse transcriptase和ChampagneTMTaq DNA polymerase,以及充分优化的缓冲体系,无论是总RNA,还是体外转录RNA,或者是病毒RNA,Hiscript®II One Step RT-qPCR Probe Kit都具有极高的灵敏度,并且不需要过多优化,就可以实现多重扩增。

Fig 1a. 以Hela细胞总RNA为模板,用Hiscript®II One Step qRT-PCR Probe Kit (Q222)扩增RFLPO基因,灵敏度可达0.1 pg。 
 

Fig 1b. 以体外转录的RNA为模板,用Hiscript® II One Step qRT-PCR ProbeKit (Q222) 扩增HBV基因,可稳定检测到10拷贝。 
 

Fig 1c. 以鸡胚尿囊液RNA为模板,用Hiscript® II One Step qRT-PCR ProbeKit (Q222) 扩增新城疫病毒特异基因,可稳定检测到10-7稀释度。 
 

 

Fig 2. 以鸡胚尿囊液RNA为模板,用Hiscript® II One Step qRT-PCR ProbeKit (Q222) 同时扩增禽流感F和M基因 (Fig 2a.)。荧光通道为FAM (M基因)和he(F基因)。

由Fig 2b, c可见,双重PCR体系中,F和M基因的扩增效率和灵敏度均与单重PCR体系中基本一致。

 

Hiscript® II One Step RT-qPCR SYBR® GreenKit

——兼顾特异性和扩增效率

SYBR® Green 法One Step RT-qPCR不需要特定的荧光探针,适合低成本、高通量的初步筛选实验。Hiscript® II One Step RT-qPCR SYBR® Green Kit含有特殊添加剂,可最大程度抑制引物二聚体的产生,从而有效提高扩增特异性,并兼顾高扩增效率。

Fig 5a. 以Hela细胞总RNA为模板,用Hiscript®II One Step RT-qPCR SYBR® Green Kit (Q221) 和对照试剂盒同时扩增B2M基因。对照产品不仅扩增效率较低,且在模板量为10 pg时的引物二聚体产量就显著高于扩增产物产量,导致结果不可信,定量范围变窄。相比之下,Hiscript® II One Step RT-qPCR SYBR® Green Kit具有更高的扩增效率以及明显的特异性优势。 
 

Fig 5b. 以Hela细胞总RNA为模板,用Hiscript®II One Step RT-qPCR SYBR® Green Kit (Q221) 和对照试剂盒同时扩增GUSB基因。对照产品不仅扩增效率较低,且在模板量为1 ng时的就出现了明显的引物二聚体;在模板量为100 pg时,对照产品的引物二聚体产量大大超过了扩增产物的产量,导致结果不可信,定量范围变窄。相比之下,Hiscript® II One Step RT-qPCR SYBR® Green Kit具有更高的扩增效率以及明显的特异性优势。

 

Hiscript® II One Step RT-PCR Kit

——高产量,并可以扩增长片段

Hiscript® II One Step RT-PCR Kit 适合终点法RT-PCR,检测灵敏度可达到10 fg人细胞总RNA (Fig 1a),以及0.2 TCLD50的病毒颗粒 (Fig 1b)。Hiscript® II One Step RT-PCR Kit对于长片段具有很好的扩增效果,可从人细胞总RNA中扩增超过10 kb的片段。

Fig 6a. 以Hela细胞总RNA为模板,用Hiscript®II One Step RT-PCR Kit (P611) 扩增555 bp GAPDH片段。检测灵敏度可达到10 fg。

Fig 6b. 以猪蓝耳病毒PRRSV RNA为模板,用Hiscript® II One Step RT-PCRKit (P611) 扩增660 bp片段。检测灵敏度可达到0.2TCLD50。

Fig 6c. 以1 μg Hela细胞总RNA为模板,用Hiscript® II One Step RT-PCR Kit (P611)扩增不同长度的片段。可以看到,Hiscript® II One Step RT-PCR Kit可成功扩增长达12.1kb的UTRN片段。

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