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ChIP-IT® Express 染色质免疫共沉淀试剂盒

放大字体  缩小字体 发布日期:2014-04-21  作者:欣博盛  浏览次数:46
公司介绍:欣博盛生物科技有限公司

 


染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,简称ChIP)是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。其原理是:在生理状态下用甲醛把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为均一的小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,使用DNA结合蛋白特异性的抗体将目的蛋白和DNA复合物沉淀下来。复合物经过洗涤,解交联,蛋白酶K消化去除DNA结合蛋白,经纯化得到感兴趣的DNA片段。纯化的DNA片段可用于后续的分析,比如qPCR,测序,ChIP-chip,ChIP re ChIP等。

Active motif公司的ChIP-IT® Express试剂盒使用protein G包被的磁珠,代替传统的琼脂糖珠,使得ChIP实验可以在1天之内完成。试剂盒可以使用超声法或酶切法进行染色质的断裂处理。每种方法都提供快速、可重复的操作步骤,省时省力,实验者更容易获得成功的ChIP结果。



                                                           
   图1 ChIP-IT® Express试剂盒的操作流程 


ChIP-IT® Express试剂盒的优点
 
● 组分完整——提供ChIP实验所需的所有试剂; 
●  可用于检测蛋白/DNA的相互作用,不仅仅限于组蛋白的修饰; 
●  与全基因组分析或PCR相关的方法兼容; 
●  无需进行试剂和操作步骤的优化; 
●  无需酚/氯仿抽提步骤——试剂盒包含DNA纯化柱,可对DNA进行快速纯化

传统的ChIP实验都是使用染色质组成相关的抗体,如乙酰化组蛋白抗体。然而对于启动子转录活性分析而言,这无法揭示出是哪种转录因子结合到我们感兴趣的启动子上。相比之下,使用转录因子特异性抗体,能够直接监测转录因子和DNA的相互作用,但是这种技术与传统的ChIP相比具有更大的挑战,需要准备多种复杂的缓冲液,抑制剂混合物和封闭试剂等。而且在缺少抗体、对照和验证的实验流程下,很难对ChIP结果进行验证。为了解决这些问题,使得ChIP实验同时适用于转录因子和组蛋白,Active motif公司的ChIP-IT® Express试剂盒提供ChIP实验所需的所有试剂,包括阳性对照和阴性对照,使得研究者更容易成功的操作ChIP。 

 








图2: 改良的ChIP(使用ChIP-IT Express试剂盒) 

PCR分析ChIP后的DNA。典型的ChIP实验每次需要2000,000个细胞,使用ChIP-IT Express试剂盒,仅需要100,000或更少的细胞既可获得阳性的ChIP结果。
用1%的甲醛固定Hela细胞10分钟,使用超声法破碎染色质,使用阴性对照IgG和RNA pol II抗体,对不同细胞数量来源(100,000到750,000个细胞)的染色质进行ChIP,重复2次。使用阳性对照引物GAPDH对ChIP后的DNA进行36个循环的PCR分析(抗体和引物包含在人ChIP-IT对照试剂盒里,Active motif也可以提供小鼠和大鼠对照试剂盒)。取10ul PCR产物进行1%凝胶电泳,EB染色后紫外观察。结果显示与使用阴性对照IgG相比,使用RNA pol II抗体的ChIP大量富集了GAPDH启动子区域的DNA序列。

相关产品信息
 供货商
 产品编号
 产品名称 
 规格
 Active Motif
 53008
 ChIP-IT® Express
 25 rxns
 Active Motif
 53009
 ChIP-IT® Express Enzymatic
 25 rxns

 

详细信息请咨询欣博盛生物,全国服务热线4006-800-892.

 
 
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