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Western-blot检测8折优惠中
促销时间:2014-03-18至2014-06-30        浏览次数:103        

 

 1.A. Western-blot检测

服务内容 
1. 从细胞、人或动物组织、细菌、植物、血清等样品中提取蛋白 
2. 对蛋白进行定性及定量分析 
3. Western blot检测 
     (1) 电泳:聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分离蛋白样品 
     (2) 湿法转印 
     (3) 杂交:用抗体鉴定膜上的特定蛋白
     (4) 化学发光检测(ECL),胶片曝光,ImageJ软件读取灰度值(可选) 
4. 预实验及正式实验:帮助客户设计样品上样顺序 
5. 免费进行胞浆蛋白内参检测(胞核蛋白内参需收取费用) 

样品要求(样品处理及保存见后)
1. 细胞>1×107;组织>50mg;细菌湿重>50mg;植物>100mg;血清>50ul 
2. 样品蛋白浓度>1mg/ml,蛋白量>200ug/样品

收费标准
960元/膜,10个加样孔

客户提供材料 
1.    新鲜或正确保存的样品 
2.    目的蛋白的一抗 
3.    阳性对照样品(尽量提供) 
4.    相关文献(可选)

提交给客户的结果 
1、预实验曝光结果(胶片及扫描图),《预实验采取2个一抗稀释度》 
2、正式实验曝光结果(胶片及扫描图) 
3、完整实验报告 
4、ImageJ软件读取灰度值(可选) 

服务项目说明
1. 提供的样品蛋白量与目的待检测的蛋白数量有关。
2. 胞浆、胞核蛋白抽提样品来源为:哺乳动物细胞、组织。如果1个样品分别提取胞浆、胞核蛋白后,以2个样品计算。另收取胞浆、胞核蛋白提取费用(100元/样品)。
3. 每张膜样品数量为1-8个,不足8个以8个收取。9-16个样品为2张膜,17-24个样品为3张膜;以此类推
     
举例:7个样品,1个目的蛋白,算1张膜;有9个样品,1个目的蛋白,算2张膜 
              7
个样品,2个目的蛋白,算2张膜,有9个样品,2个目的蛋白,算4张膜 
        
以上为一般算法。如果客户样品数量需要按照组别等来进行上样时需要重新确定 
每张膜的上样量及膜的张数。
4. 选择部分样品进行预实验,参考目的蛋白一抗说明书进行2个稀释度的预实验 
5. 向客户反馈预实验结果,等待客户确认预实验结果后确定是否进行正式实验 
6. 请您提供质量保证的一抗(或委托我公司代购)。抗体的使用量通过预实验后进行确认,一般不回收使用一抗。 
7. 如果需要对膜上蛋白进行抗体剥离(洗脱或者 stripping)的,请提前说明(收费不同)。 
8. 建议提供目的蛋白阳性表达样品(纯蛋白、有阳性表达的细胞或组织、商品化的阳性对照产品等)作为阳性对照 。
9. 免费内参检测为:beta-actin,beta-tubulin,GAPDH,如果同时检测胞浆、胞核蛋白内参时胞核蛋白内参(Lamine B1)需要收取费用(100元/膜)。 
10. 如需进一步数据分析:ImageJ软件读取灰度值、Normalization处理,请另询价。 
11. WB特殊要求请咨询

附:样品处理及保存(极为重要) 
1、悬浮细胞样品:把细胞及培养液一起收集到15ml或者50ml离心管中,1500rpm离心3min,弃去上清;加入10ml 冷PBS轻轻吹打,1500rpm,4℃离心3min,弃去上清;反复2次;第二次弃去上清后,用1ml 冷PBS重悬细胞,移入1.5ml微型离心管,2500rpm(500g),4℃离心5分钟,尽量去除所有残留上清,于-80度或者液氮冻存待用。在避免冻融的情况下,一般保存1年,建议尽快检测。 
2、贴壁细胞样品: 
2.1 胰酶消化:用胰酶将细胞消化后,含血清的培养基中和胰酶,吹打,收集到15ml或者50ml离心管中,1500rpm离心3min,弃去上清;加入10ml 冷PBS轻轻吹打,1500rpm,4℃离心3min,弃去上清;反复2次;第二次弃去上清后,用1ml 冷PBS重悬细胞,移入1.5ml微型离心管,2500rpm(500g),4℃离心5分钟,尽量去除所有残留上清,于-80度或者液氮冻存待用。在避免冻融的情况下,一般保存1年,建议尽快检测。 
2.2 细胞刮子收集细胞:对于某些蛋白(即对胰酶比较敏感或者实验特殊要求,如E-Cadherin不易用胰酶消化后进行WB检测),直接用细胞刮子刮下细胞,连同培养基收集到15ml或者50ml离心管中,1500rpm离心3min,弃去上清;加入10ml 冷PBS轻轻吹打,1500rpm,4℃离心3min,弃去上清;反复2次;第二次弃去上清后,用1ml 冷PBS重悬细胞,移入1.5ml微型离心管,2500rpm(500g),4℃离心5分钟,尽量去除所有残留上清,于-80度或者液氮冻存待用。在避免冻融的情况下,一般保存1年,建议尽快检测。 
3、动物组织样品:取下合适的动物或者人的组织样品后用预冷的PBS或者生理盐水漂洗,尽量除尽残留血液,用滤纸把多余PBS吸取干净。把组织分成约50mg大小(依据实验目的需要进行调整),用锡纸分别包装好或者用冻存管装好,于-80度或者液氮中保存。在避免冻融的情况一般保存1年,建议尽快检测。 
4、植物样品:取得待测植物样品后,用蒸馏水把泥土漂洗干净,用滤纸把多余水分吸取干净,分装成合适大小于-80度或者液氮中保存。在避免冻融的情况一般保存1年,建议尽快检测。 
5、细菌样品:细菌培养完成后,10000rpm离心5min收集细菌,加入PBS吹打,10000rpm离心5min,弃去上清;反复3次,弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。 
6、若要检测磷酸化蛋白,请在3个月内进行。长时间保存样品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而检测不到磷酸化条带。 
7、提取胞浆、胞核蛋白的样品应尽量采用新鲜样品,因为冻存会使细胞浆、细胞核破裂。 
8、血液样品(血浆中蛋白):3000rpm离心20min后收集上清,分装后于-80度或者液氮冻存待用。3个月以内检测。 
9、运输时间较长或长距离运送样品时采用干冰或者液氮。 
10、样品的实际需要量请打电话咨询。 

抗体保存及使用 
应严格按照抗体说明书进行保存,避免出现不必要的麻烦。在-20度保存呈液体状态的抗体请不要分装。新购抗体要在2-3月以内进行WB检测等实验,以验证抗体的有效性。一般新购抗体有非特异条带等问题出现,2-3个月内没有反馈给抗体公司,抗体公司将不再受理投诉。

 

技术项目
收费标准
1. 表达检测、相互作用检测
1.A. Western-blot检测
1200元/膜,10个加样孔
1.B. ELISA检测
960元/48孔,1500元/96孔
1.C. Real-time PCR检测
详见第7页
1.D. Co-IP(免疫沉淀)
3000元/实验
2. 分子生物学
 
2.A. 原核、真核常规表达载体构建
2000元/载体
2.B. 真核表达慢病毒载体构建、病毒包装
2000元/载体,2000元/病毒包装
2.C. RNAi慢病毒载体构建、病毒包装
2000元/载体,2000元/病毒包装
2.D. 定点突变、片段删除突变
2000元/定点突变,3000元/片段删除
2.E. 质粒、基因组DNA、RNA大量提取
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3. 细胞生物学
 
3.A. 基因过表达稳定细胞系建立
4000元/细胞系
3.B. 基因敲低稳定细胞系建立
4000元/细胞系
3.C. CRISPR/Cas9系统基因敲除细胞系建立
咨询
3.D. 细胞增殖实验(MTS法)
800元/两种细胞系比较
3.E. Transwell细胞迁移、
100元/Transwell
4. 抗体制备
4.A. 兔多克隆抗体
咨询
4.B. 小鼠单克隆抗体
咨询
 

 
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