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Evrogen公司DSN酶和cDNA 均一化试剂盒65折优惠
促销时间:2014-07-01至2014-09-30        浏览次数:504        

 深圳市纽邦生物技术有限公司,为Evrogen一级代理商!

    现我公司推出cDNA 均一化试剂盒与双链特异性核酸酶(Duplex-specific nuclease,DSN) 优惠大促销活动,活动期间,通过深圳纽邦生物购买cDNA 均一化试剂盒或 双链特异性核酸酶(Duplex-specific nuclease,DSN)产品,即可获得 65折优惠!   
      活动时间: 2014年7月1日至2014年9月30日 

品牌 货号 品名 规格 65 折促销价格
Evrogen NK003 Trimmer-2 cDNA normalization kit For 10 reactions 8190

 

品牌 货号 品名 规格 65 折促销价格
Evrogen EA001 Duplex-specific nuclease  DSN 50 U 3822
Evrogen EA002 100 U 5460
Evrogen EA003 10 U 1420


     

    Evrogen公司是由一批极富创新经验的科学家于2000年成立的一家生物公司,一直处于快速发展模式。Evrogen致力于为生命科学研究提供优质高效的产品和服务。Evrogen发明、发展和提供新技术用于分子生物学领域,为加速生命科学新基因的发现和研究提供高端解决方案。
    Evrogen 的总部设在俄罗斯首都莫斯科,可以非常便利地整合世界著名科学家和发明者的各项科研成果和技术,提供高质量的基因克隆服务和新型的细胞和分子生物学研究产品。Evrogen与多家莫斯科生物和医学分子技术实验室建立合作关系,专注于开发和建立生命科学研究新工具。目前其研发计划集中在开发新型的分子遗传学、细胞生物学技术和材料,尤其在分子细胞生物学荧光成像应用领域独树一帜。
 
 

Trimmer-2 cDNA normalization kit原理: 
    在真核细胞中,各种mRNA以不同丰度构成了总RNA的1%。一般来说,5-10个高丰度表达基因转录在单个细胞中可达到几千个拷贝,占mRNA的20%,500-2000个中等丰度表达基因转录在单个细胞中有几百个拷贝,占mRNA的40-60%;而剩下20-40%的mRNA则是由一到几十个拷贝的低丰度转录本组成。这种基因转录水平上的巨大差异使大规模的转录分析复杂化,导致多丰度cDNA的重复测序,给文库的筛选和分析带来障碍。 
    cDNA的均一化降低了高拷贝基因的丰度,使在cDNA样本中的基因浓度趋于一致,因此可以大大提高测序的效率和发现极低丰度基因的能力。 
    利用Duplex-Specific Nuclease(DSN)进行cDNA均一化是一种可应用于全长丰富的cDNA均一化的高效方法。此方法基于核酸杂交动力学和双链DNA特异的DSN酶的独特特性。 
   DSN是来自红金蟹的一种特异性核酸酶,具有热稳定性,在60-65℃时具有最大活力,即使在70℃高温孵育20min后仍然具有25%的活力,正是由于DSN的热稳定性,在cDNA复性条件下dsDNA降解,可以防止二级结构和sscDNA片段里的adapter sequences非特异性杂交的形成。 
   复性过程中,高丰度基因更频繁地转变为双链的cDNA。这样,就明确地形成了两部分:高风度的cDNA部分和均一化的单链cDNA,接着双链cDNA被DSN降解;ss cDNA可经PCR放大,对PCR引物和条件进行了优化,减少对更短片段的扩增趋势。 
    可进行均一化的cDNA的制备应该基于总RNA或者poly(A)+RNA,并且在两端应该含有已知的adapter sequences以用于PCR扩增。对于构建全长cDNA文库来说,RNA的质量是至关重要的。在cDNA合成过程中,可用多种方法在cDNA末端引入侧翼序列,如:adapter连接和模板交换法。 
    利用DSN均一化已成功用于多种动物和植物模型,这种灵活的均一化方法稍加修改即可应用于多种用途。 

应用: 
    DNAnormalization技术是一种新型的高效平衡化未克隆的全长富集cDNA的有效方法。Trimmer-2试剂盒是Evrogen公司独有产品,利用DNAnormalization技术,高效降低高丰度表达基因、富集低丰度表达基因,得到的cDNA包含相等浓度的不同基因,可应用于cDNA文库的构建和直接测序,以及在后续的测序平台Illumina/Solexa、ABI/ SOLiD和Roche / 454上的高通量测序。另外,这个试剂盒还与构建cDNA的ClontechSMART-based kit兼容,来用于cDNA均一化。 
特点: 
1、快速有效地降低在文库中高拷贝存在的cDNA 的丰度 
2、克隆文库前对全长丰富的cDNA进行均一化 
3、操作简单,无需物理分离步骤 
4、与Illumina /Solexa,,ABI / SOLiD和Roche / 454的测序实验完全相容 

典型结果图: 

    
(A) Agarose/EtBr gel-electrophoresis of non-normalized (1) andnormalized (2) human cDNA samples; 
(B) concentration of abundant transcripts in these samples revealed byVirtual Northern blot. GPDH – glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase;UBC – ubiquitin C; M, 1-kb DNA size markers (SibEnzyme). 
(C) Normalization significantly increases gene discovery rate of cDNAlibrary. Transcript distribution in standard and normalized cDNAlibraries from Aplysia neurons: yellow – all sequences, blue – uniquesequences; green – non-unique sequences

 


 
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