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Picogreen dsDNA双链DNA定量检测
促销时间:2015-11-01至2016-01-31        浏览次数:308        

 Picogreen dsDNA双链DNA(dsDNA)定量检测

检测原理

Picogreen是一种极为灵敏的荧光核酸染料,常用于双链DNA的定量检测。历来DNA浓度的测定在cDNA文库的构建,DNA亚克隆、PCR产物的估测等领域中具有重要意义。疫苗等生物制品中残留微量DNA的检测更是直接关系到人类的健康。

Picogreen仅在与DNA双链结合后才发出荧光,且所产生的荧光与DNA浓度呈正比,在存在ssDNA、RNA和单体核苷酸的条件下,可以选择性地检测低至25pg/ml的dsDNA。该分析在三个数量级范围内呈线性,且几乎无序列依赖性,可以精确地测量多个来源的DNA,包括基因组DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR扩增产物。可用荧光分光光度计或荧光酶标仪读数,Ex/Em=480nm/520nm。

产品优势

相比传统的方法,如紫外吸光法(A260)、探针杂交法、Hoechst 33258染料法等,Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下优势:

①灵敏度高:数量级较UV吸光读数更敏感,可节省宝贵的样品;

②特异性强:在等摩尔的RNA存在的条件下,对dsDNA具有特异性;

③耐受性好:耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖,可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。

④易于使用——只需在样品中加入染料,等待5分钟,然后读数即可,且适用于96和384孔板;与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。

⑤适用范围广:可适用于PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活性分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。

产品应用

测定微量的DNA残留(如疫苗生产);对DNA样品进行精确定量

运输和保存方法

室温运输。4℃避光干燥保存,有效期6个月。

检测步骤【以双链DNA定量检测试剂盒为例】

2µg/mlCalf thymus DNA standard浓缩液的配制

用1×TE对Calf thymus DNA standard (100µg/ml)进行50倍稀释,即向30µl Calf thymus DNA standard加入1.47ml 1×TE混匀即可。

2、标准曲线的制备

① 比色皿体系检测(2ml)

a、按照表1 向一次性微量比色皿中加入TE和2µg/ml Calf thymus DNA standard,随后加入1ml PicoGreen定量试剂,混匀后,于室温避光孵育2-5min,并以1×TE缓冲液为blank。【注】:确信不要在样品中引入气泡,轻轻地弹微量检测皿的外部,可以驱散气泡。

TE (µl)

2µg/ml Calf thymus DNA standard (µl)

稀释的PicoGreen定量试剂 (µl)

Calf thymus DNA standard终浓度

0

1000

1000

1µg/ml

900

100

1000

100ng/ml

990

10

1000

10ng/ml

999

1

1000

1ng/ml

1000

0

1000

blank

b、于荧光仪中检测各浓度荧光值,Ex/Em=480nm/520nm。

【注】:为了确保荧光读数在荧光仪的检测范围内,应调节增益使含最高DNA浓度的样品荧光值与荧光仪的最大值一致;为了减少光漂白,应保持所有样品的检测时间一致。

c、各浓度得到的荧光值减去空白对照荧光值,对DNA浓度和荧光值做标准曲线。

② 微孔板体系检测(200µl)

a、按照表2 向96孔板中加入TE和2µg/ml Calf thymus DNA standard,随后加入100µl PicoGreen定量试剂,混匀后,于室温避光孵育2-5min,并以1×TE缓冲液为blank。【注】:确信不要在样品中引入气泡,轻轻地弹微量检测皿的外部,可以驱散气泡。

表2酶标板体系所需加入各组分量及标准品终浓度表

TE (µl)

2µg/ml Calf thymus DNA standard (µl)

稀释的PicoGreen定量试剂 (µl)

Calf thymus DNA standard终浓度

0

100

100

1µg/ml

90

10

100

100ng/ml

99

1

100

10ng/ml

99.9

0.1

100

1ng/ml

100

0

100

blank

b、于荧光酶标仪中检测各浓度荧光值,Ex/Em=480nm/520nm。

【注】:为了确保荧光读数在荧光仪的检测范围内,应调节增益使含最高DNA浓度的样品荧光值与荧光仪的最大值一致;为了减少光漂白,应保持所有样品的检测时间一致。

c、各浓度得到的荧光值减去空白对照荧光值,对DNA浓度和荧光值做标准曲线。

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产品编号

产品名称

规格

价格(元)

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