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小鼠凋亡PCR芯片年底大促850元一个样
促销时间:2015-12-04至2015-12-31        浏览次数:338        
简介: 小鼠凋亡PCR芯片,同时检测凋亡相关84个基因
提供商: 启因生物
服务名称: 小鼠凋亡PCR芯片
地区: 上海
规格: 一个样品
1. 运费:客户承担
3. 实验周期:收到样品起,10个工作日内
4. 申请要求:只需提供小鼠样品,组织细胞RNA都可以
5. 其他说明:包含数据分析


小鼠凋亡PCR芯片,同时检测凋亡相关84个基因
 

1.PCR 芯片介绍


    实时定量 PCR 是检测基因表达最灵敏、最可靠的方法。通过在试验过程中,实时监测荧光染料的信号变化可反映出样品中的基因拷贝数,并且实时定量 PCR 线性范围广(能达到 5 个数量级),因此可以检测同一样品中表达量极低的基因和表达量很高的基因。但是,由于实时定量 PCR 需要制备标准曲线和同时分析内参基因,因而每次实验只能检测少数几个基因的表达水平,若要检测大量基因,则工作量巨大,耗时长久。通过简单的以及经过优化的实时定量 PCR 体系, PCR 芯片随之开发出来,研究者可以同时研究大量基因,既可以进行某些特别感兴趣的信号通路的研究,也可以作为验证芯片结果的方法, PCR 芯片可广泛用于生命科学、生物技术、疾病检测、临床医学和环境检测等领域,是近年生命科学领域的研究热点之一。 


2.操作步骤


    采用 PCR 芯片进行实验只需 2 小时。 PCR 芯片实验过程:首先将 RNA 样品反转录为 cDNA 第一链,作为 PCR模板;接着,将模板加入到反应体系( RT2 Real-TimeTM SYBR  Green PCR Master Mix )中。在已经固定好基因特异性引物的 96 孔板各孔中,加入等量的 PCR 反应体系,进行 PCR 反应。采用仪器配套的软件计算 PCR 芯片中的每个基因的循环阈值( Ct )。最后,采用 △△ Ct 方法比较对应的两个样本中同一基因的表达量变化。通过分析看家基因 Ct 值的一致性,可确定合适的标准化方法。芯片所设置的对照,可以检测 PCR 体系中是否存在 DNA污染,或者是否有影响反转录或 PCR 实验步骤的因素存在。


3.技术难度


    采用 PCR 芯片开展研究,技术上的难点是如何在同一次实验中,相同的 PCR 反应条件下保证不同的基因有相近的扩增效率,并且获得与单个基因实时定量 PCR 反应相当的灵敏度,特异性和可重复性。因此首先设计筛选出最佳的候选引物,接着通过实验,在不同反应条件下,检测 PCR 反应体系与几千条 PCR 引物的组合,最终获得了优化的引物和 PCR 反应体系,适应 PCR 芯片的要求。


4.检测数量

  

    根据一次实验所检测样品数量的多少,可将 PCR  芯片分为低通量和高通量  PCR  芯片。 低通量 PCR  芯片的载体为  96  孔或  384    PCR 反应板,仅须将制备好的样品 cDNA 加入相应的反应孔内,在荧光定量 PCR 仪上进行扩增即可。在灵敏度方面,每次扩增仅需 400 ng    RNA 。但低通量 PCR  芯片所检测的基因数量有限,而且无法进行多个样品的多个基因的并行检测。低通量 PCR  芯片使用时和通常的定量  PCR  操作步骤相同,即从待检的生物样品(细胞、组织、血液等)中提取总 RNA  或分离出  mRNA →经反转录形成 cDNA →将所得的  cDNA  直接等量加入含有相应待检测基因引物的孔中→加入 PCR mix →在荧光定量 PCR  仪上进行  PCR  定量检测→数据分析。


    高通量 PCR  芯片是在固相载体上固定有成百上千个基因的特异性引物,并且可同时检测高达成百上千个样品,达到同时并行检测多个样品的多个基因表达的能力。因此,具有检测通量高、耗时短和样品用量少的优点。目前,由 Applied Biosystems   公司研制的 OpenArray System Fluidigm  公司开发的 BioMark System 将荧光定量 PCR  技术与高通量芯片技术相结合,属于高通量 PCR  芯片,但这些芯片必须在特定的定量 PCR  仪器上使用进行。


5.优势


    P CR 芯片与常规 PCR 相比: 1.  整体性, PCR 芯片操作系统采用多基因扩增、结果分析一体化,操作简便;传统的 PCR 采用单基因扩增及结果分析,操作繁琐; 2.  时间, PCR 芯片检测多个基因的时间是过去 PCR 检测单个基因的时间; 3.  试剂,传统 PCR 对试剂用量有要求, 15 微升以下就很难得到理想的扩增结果, PCR 芯片可以扩增 10 微升以下的样品,这相应减少了试剂如 Taq 酶的用量,节省了实验经费也减少了废液污染。因此,与常规的 PCR 扩增技术相比, PCR 芯片具有反应体积小、反应速度快、操作简便、价格低、样品用量少、无污染、节省试验成本、便于集成化、结果可靠的优点。


6.应用


    使用 PCR 芯片技术进行基因表达(信号通路或多个相关基因)的检测,已普遍用于生命科学研究的多个领域,如疾病发病机制研究,并且 PCR  芯片作为一种快速、准确的技术手段,可应用于药物机理研究中。


7.发展方向


    PCR 芯片不仅成本低,而且试样、试剂、人力三者消耗量均低,   速度也快,   灵敏度高。作为 DNA 分析的重要工序 PCR ,更是现代生物、医药不可或缺的部分,其没备的集成化,如样品预处理系统、分离系统以及检测系统等的集成使 PCR 芯片在生命科学、生物技术、疾病检测、临床医学和环境检测等领域继续发挥重要作用。


 
Real-time PCR arrays  are tools that allow convenient testing of samples in many assays concurrently, parallel testing of many samples or testing of multiple 
samples and targets simultaneously.    
  
实时PCR数组工具,允许方便的测试样本在许多并发化验,并行测试的样品或测试多个样本同时和目标。                                                                                                              ——Saunders N A(2013) 
检测基因列表:
mmu-CRADD mmu-FADD mmu-TNF mmu-TNFRSF10B mmu-CIDEA mmu-CIDEB
mmu-TP53 mmu-TRP63(TP63) mmu-TP73 mmu-CFLAR(CASPER) mmu-DAPK1
mmu-BAD mmu-BAK1 mmu-BAX mmu-BCL10 mmu-BCL2L11 mmu-BID
mmu-BNIP3 mmu-BNIP3L mmu-BOK mmu-CASP1 mmu-CASP14 mmu-CASP2
mmu-CASP4 mmu-CASP6 mmu-CASP8 mmu-TNFSF7 mmu-DFFA mmu-DFFB
mmu-DIABLO (SMAC) mmu-FAS (TNFRSF6) mmu-FASLG (TNFSF6) mmu-MAPK1(ERK2) mmu-CARD4
 mmu-PYCARD(TMS1/ASC) mmu-TNFSF10(TRAIL) mmu-TP53BP2
mmu-TRAF3 mmu-AKT1 mmu-API5 mmu-ATF5 mmu-BAG1 mmu-BAG3 mmu-BCL2L1(BCL-X)
 mmu-BCL2L10 mmu-BCL2L2 mmu-BIRC3(C-IAP1) mmu-BIRC5 mmu-BNIP2 mmu-CD40LG (TNFSF5) 
mmu-DAD1 mmu-IGF1R mmu-IL10 mmu-LHX4 mmu-MCL1 mmu-BIRC1(NAIP1) mmu-NAIP2(BIRC1B)
 mmu-NFKB1 mmu-NME5 mmu-NOL3 mmu-POLB mmu-PRDX2 mmu-BIRC4(XIAP) mmu-BCL2A1 mmu-BIRC2(C-IAP2) 
mmu-ABL1 mmu-ANXA5 mmu-CARD10 mmu-CD40 (TNFRSF5) mmu-GADD45A mmu-LTBR mmu-TNFSF12 mmu-TRAF1
 mmu-TRAF2 mmu-RIPK1 mmu-TNFRSF11B mmu-TNFRSF1A mmu-CASP7 mmu-CASP9 mmu-AIFM1(PDCD8) mmu-APAF1 
mmu-CASP12 mmu-CASP3 mmu-BCL2

 
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