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RNA干扰服务

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品牌: 雨汐
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发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 江苏 无锡市
有效期至: 长期有效
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明

 

RNA干扰(RNA interfering,RNAi)现象是由与靶基因序列同源的双链RNA引发的广泛存在于生物体内的序列特异性基因转录后的沉默过程。由于RNAi具有高度的序列专一性和有效的干扰,可以特异地将特定的基因沉默,从而获得基因功能丧失或基因表达量的降低,因此可以作为功能基因组学的一种强有力的研究工具。RNAi技术可广泛应用到包括功能学,药物靶点筛选,细胞信号传导通路分析,疾病治疗等等。我们可对靶基因序列进行干扰位置效应评价和序列同源型分析,完成siRNA/shRNA/miRNA等多种序列的设计,并提供从siRNA合成、RNAi载体构建到RNAi相关的病毒包装、RNAi功能验证等全面的RNAi解决方案。
※ RNAi服务类别
1、siRNA
对于瞬时基因沉默实验,化学合成siRNA的方法操作简便,容易获得高水平的瞬时沉默效果,特异性强。我们通过严格设计来增强siRNA的专一性;针对某靶基因设计的3条siRNA可保证其中两条的Knockdown效率达到70%(在转染效率大于80%的情况下)。
1.1 普通siRNA:均由HPLC纯化,100%除去尚未配对的单链
1.2 化学修饰siRNA:利用2’-Fluoro或2’-OMe修饰以提高siRNA在血清和培养基中的稳定性;作用时间长于普通siRNA
1.3 荧光标记siRNA
2、RNAi载体
RNAi载体表达可以长时间稳定地研究基因功能,载体在细胞中持续抑制靶基因的表达可达数星期甚至更久。
    miR-RNAi载体构建-利用细胞内源性的miRNA加工机制,相比传统shRNA载体可更高效地表达RNA发夹结构,并具有采用EmGFP进行表达追踪和顺式表达多个miRNA的优点。针对人类、大鼠、小鼠的大多数基因预先设计好了miR RNAi序列,每个基因设计的4条 miR RNAi Select序列我们保证至少有2条可以达到至少70%转录水平的knockdown(在转染效率>80%的前提下)。
2.2 shRNA载体构建—设计针对特定基因的shRNA序列,并将其连入组成型pENTR™/U6或诱导型pENTR™/H1/TO载体中。
3、RNAi导入优化
由于siRNAs是进入细胞后才能对蛋白的表达进行抑制,因此如何高效地将siRNAs转入细胞也是成功抑制基因表达的关键步骤。例如,一个siRNA分子对某特定基因的抑制效率为90%,而转染效率为10%,那么最后抑制蛋白表达最后的效率只有9%,可见如何提高siRNAs的导入效率非常重要。
3.1 RNAi转染优化-为了使得RNAi实验获得最大化的干扰效果,利用脂质体转染试剂技术,针对多种真核生物细胞进行转染参数的优化。RNAi 荧光标记的阴性对照、阳性对照可以用于进行转染效率的优化。
3.2 病毒侵染优化-针对难于转染细胞(特别是神经细胞、悬浮细胞、干细胞)和In vivo实验,基于的RNAi病毒载体构建、包装、浓缩等技术,利用腺病毒或慢病毒进行RNAi研究
3.3 筛选RNAi稳定细胞株-利用抗生素来筛选稳定表达shRNA或miRNA的细胞株
4、RNAi干扰效果检测
用实时定量PCR方法检测mRNA水平的基因敲减效果;通过Wester blot方法检测蛋白水平的基因敲减效果

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