HSTM Mix
货号 |
规格 |
价格 |
P2081 |
1 ml(40次,50 μl体系/次) |
120 |
P2082 |
1 ml×5(200次,50 μl体系/次) |
500 |
产品组分
P2011
2×HSTM Mix 1ml 1支
超纯水 1ml 1支
P2012
2×HSTM Mix 1ml 1支×5
超纯水 1ml 1支×5
注: 本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品,PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。
保存条件
-20℃保存2年。
请勿保存于-70℃,防止反复冻融导致酶活降低。
产品说明
HSTM Mix是2×浓缩的高特异性PCR预混和溶液,含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时,仅需在
扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR,大大简化操作过程,缩短操作时间,降低污染(加样次数减少)。HSTM Mix的反应体系经特殊优化,减少引物二
聚体的形成,显著提高PCR扩增的特异性。同时,由于体系内含有增强剂,能够显著增强PCR扩增的灵敏度。扩增产物具有3’-dA突出端。
Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶,分子量为94 KD。扩增片段的长度可达5 kb(简单模板)。延伸速度为0.9-1.2 kb/ min
(70-75 ℃)。该酶具有5’→3’聚合酶活性,无3’→5’外切酶活性。
产品特点
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高特异性
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使用方便:仅需加入模板和引物即可进行PCR扩增。
-
快速、高效:减少加样步骤,节约时间。
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可重复:降低污染和加样错误风险
产品用途
-
高特异性PCR检测
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高通量PCR检测
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高重复性PCR检测
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制备TA克隆用的PCR产物
活性定义
一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃、30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。
质量控制
相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染;PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因;室温放置一周,
扩增活性无明显改变。
2×HS Mix的组分
50 mM KCl
20 mM Tris-Cl
3 mM MgSO4
400 mM dNTP混合物
0.1 U/μlTaq DNA聚合酶
溴酚蓝等
应用举例
注:以下反应举例为50 μl标准PCR体系,仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化,确定最佳反应条件。
以λDNA为模板,扩增1kb片段。
λ DNA(2.5 ng/μl) 1μl
Primer 1(10μM ) 2μl
Primer 2(10μM) 2μl
2×HSTM TaqMix 25μl
dd H2O 补足至50μl
反应条件
95℃ 3 min
95℃ 30 sec
55~68℃ 30 sec 30 Cycles
72℃ 1 min
72℃ 10 min
备注:
1 Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在PCR产物的3'末端通常会加上1个多余的脱氧腺嘌呤核苷。
2 建议在冰上配置PCR 反应液后,再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性,减少非特异性扩增,得到良好的PCR结果。
3 模板DNA推荐用量(50 μl PCR反应体系)
人类基因组DNA 0.1 μg ---1 μg
λDNA 0.5 ng---5 ng
质粒DNA 0.1ng-10 ng
大肠杆菌DNA 10 ng-100 ng
4 HSTM Mix的扩增产物经纯化后可直接用于测序反应。
Q&A
问:为什么HSTM Mix的特异性会高于PCR Mix?
答:这是由于东盛对HSTM Mix反应缓冲液中的离子浓度等因素进行了优化。PCR引物在不同的离子浓度条件,与模板的结合能力差异显著。经过优化,
HSTM Mix能够显著提高引物与模板结合的严谨性,从而提高PCR扩增的特异性,降低背景。在少数情况下,HSTM Mix的扩增效率可能低于PCR Mix。
问:HSTM Mix的扩增产物能否直接进行TA克隆?
答:直接进行TA克隆。
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