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PCR产物及DNA片段纯化试剂盒

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品牌: 东盛
型号: N1091/N1092/N1093
规格: 50次/100次/200次
单价: 280.00元/盒
起订: 1 盒
供货总量: 99 盒
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 广东 广州市
有效期至: 长期有效
浏览次数: 1
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明

PCR产物及DNA片段纯化试剂盒

 

 

货号

规格

价格

N1091

50次

280

N1092

100次

510

N1093

200次

945

 

 

产品组分

 

组分

货号

N1091

N1092

N1093

溶液BD

20 ml

40 ml

80 ml

溶液PE

15 ml

15 ml×2

20 ml×3

溶液Eluent

2.5 ml

5 ml

10 ml

DNA纯化柱

 50个

 100个

 200个

说明书

1份

1份

1份

 

注:溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释,即含80%乙醇。

        溶液BD中含有变性剂,请不要直接接触皮肤。

       上述产品组分均可单独购买,详见产品索引。

 

保存条件

室温保存2年。

 

产品说明

本产品采用传统的硅胶柱膜吸附技术,用于从PCR或其他各种酶促反应液中纯化DNA片段(50 bp-40 kb)。其纯化原理是硅胶膜柱高效可逆地吸附体系中的DNA

片段(高盐、低pH值),同时去除酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他杂质,被吸附的DNA再在低盐、高pH值条件下再被洗脱纯化。一次可回收30 μg高纯度DNA

片段,此DNA片段可直接用于各种酶促反应等。

 

产品特点

  • 回收片段范围广:50 bp-40 kb。
  • 高效:回收率大于85%。
  • 高纯度:OD260/OD280 = 1.7-1.9。产物不含酶蛋白、核酸引物、dNTP。无须再纯化,可直接使用。
  • 快速:15min完成实验。

 

产品用途

  • 常规限制性酶切
  • PCR扩增
  • 转化
  • DNA序列测定
  • 体外转录

 

质量控制

从PCR扩增产物中纯化50 bp和1000 bp的DNA片段。

 

PCR产物纯化流程图

图1  PCR产物纯化流程图

 

操作方法

1  确定PCR反应液或其他酶促反应液的体积。将PCR反应液或其他酶促反应液转移至一个新的1.5 ml离心管中,向其中加入等体积溶液BD。混合均匀。

2  将步骤1所获溶液置于DNA纯化柱中,静置2min。

3  12,000 rpm离心1min,弃滤液。

   注:此时DNA片段被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

           若溶液体积大于纯化柱容积(800 μl),可分两次离心。

4  加入500 µl溶液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

   注:溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释,即含80%乙醇。

           此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他杂质,以获得高质量DNA片段。

5  加入500 µl溶液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

6  12,000 rpm 离心 3min,以彻底去除纯化柱中的液体。

   注:此步骤的作用是去除残留乙醇,避免残留乙醇影响后续酶促反应。同时也利于DNA片段的充分溶解。

7  将离心柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱的中央处,悬空滴加30-100 µl溶液Eluent(60℃预热),静置2min。12,000 rpm 离心1min,管底即为目的DNA

片段。贮存于-20℃。

   注:溶液Eluent可用无菌双蒸水代替,但其pH需为8.0-8.5,加入体积视DNA目的片段的多少、用户对目的片段浓度要求而定。

          对溶液Eluent 60℃预热,会提高提取DNA目的片段的产量。

 

图2  PCR产物纯化电泳图

 

 

 

 注意事项

1  本试剂盒适用于无选择性的回收体系中所有的DNA 片段。如需选择性回收特定片段,同时去除其他不同大小片段,建议选择凝胶回收试剂盒。

2  本试剂盒纯化柱的DNA吸附能力强。如果DNA浓度小,或DNA初始量少,回收率将会偏低。

3  所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心,速度为12,000 rpm(约13,400×g)。

4 溶液 Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA片段可直接用于各种酶促反应等,不会影响后续试验。

 

DNA 浓度及纯度检测

1  回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在OD260 处有显著吸收峰, OD260 值为1 相当于大约50 μg/ml 双链DNA、40 μg/ml 单链

DNA。

2  OD260/OD280 比值应为1.7–1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

 

 

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