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组织/细胞基因组DNA快速提取试剂盒

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品牌: 东盛
型号: N1141/N1142
规格: 50次/100次
单价: 485.00元/盒
起订: 1 盒
供货总量: 99 盒
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 广东 广州市
有效期至: 长期有效
浏览次数: 21
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明

 

组织细胞基因组DNA快速提取试剂盒

 

 

货号

规格

价格

N1141

50次

485

N1142

100次

875

 

 

产品组分

 

组分

货号

N1141

N1142

消化缓冲液DS

15 ml

30 ml

裂解液MS

20 ml

40 ml

蛋白酶K

1 ml

2 ml

去蛋白液PS

30 ml

60 ml

漂洗液PE

15 ml

30 ml

纯化液TE

5 ml

10 ml

DNA纯化柱

 50个

 100个

说明书

1份

1份

 

注: 裂解液MS有轻微腐蚀性,请不要直接接触。

          漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

 

保存条件

蛋白酶K于-20℃保存。

其余试剂置于室温(15-25℃)干燥条件下保存1年。

消化缓冲液DS如有沉淀,在55℃加热溶解,待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。

 

产品说明

    本产品用于多种动物组织(新鲜或冻存)与培养细胞等样本的基因组DNA的纯化。其纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA,由硅胶膜柱可逆

吸附基因组DNA,经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质后,用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品可从不超过10 mg组织材料或不超过1×106-107

培养细胞中提取到3-35 μg 超纯基因组DNA(OD260/OD280 = 1.7-1.9),此基因组DNA可直接用于PCR、酶切、文库构建等后续实验。

 

产品特点

  • 高效:一次可获得3-35 μg基因组DNA。
  • 快速:30min内即可获得超纯的基因组DNA。
  • 通用:可从多种样本材料中获取基因组DNA。
  • 安全: 整个操作中不用酚/氯仿有机物。
  • 高纯度:无须再纯化即可直接用于下游实验。

 

产品用途

  • 常规限制性酶切
  • PCR扩增
  • 文库构建
  • Southern 杂交
  • 分子标记分析

 

质量控制

纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷基因的PCR扩增鉴定。

 

基因组DNA提取流程图

图1  基因组DNA纯化流程图

 

操作方法

1  材料处理

[动物组织]

    取少量样本材料,放入液氮预冷的研钵中。快速用力研磨的同时加入少量液氮,直至样本材料被研磨成粉末。将研磨好的样本转移至1.5 ml离心管中,每管组

织材料含量应不超过10 mg。

   注: 某些匀浆困难,或在匀浆过程中DNA容易降解的特殊组织应加液氮研磨。如DNA酶含量丰富的组织:肝脏、脾脏、胰腺、胸腺、淋巴等;胶原蛋白含量丰富的组织:皮

肤、肌腱等;角质蛋白含量丰富或坚硬的组织:骨骼等。

        如没有液氮。可用用剪刀剪成小块,放入研钵或匀浆器中,加入适量TE(pH 8.0),处理成细胞悬液。将不超过10 mg当量的细胞悬液转移至一个新的1.5 ml的离心管中,

12000 rpm离心1min,弃上清,收集沉淀。

    每支离心管中的样本当量不宜超过10 mg。每10 mg样本材料可获得10 μg基因组DNA。样本量过大,将会影响细胞核裂解效率并可能堵塞纯化柱,进而降低基因组DNA的得率

纯度。

[细胞]

贴壁细胞:先用胰酶将贴壁细胞处理成细胞悬液,转移至1.5 ml离心管中12,000 rpm离心1min,弃上清。

悬浮细胞:直接取适量转移至1.5 ml离心管中12,000 rpm离心1min,弃上清。

     注:每只离心管内的细胞量不应超过1×106-107

2  加入200 μl消化缓冲液DS,漩涡振荡直至形成完全均一的悬浮液。

    注:如需去除RNA,可加入4μl RNase A(100 mg/ml),振荡混匀。室温放置5min。

3  加入20 μl蛋白酶K和220 μl裂解液MS,漩涡振荡混匀。65℃温浴10min。溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠。

   注:加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀,一般65℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 不

纯。        

     如果是比较致密难裂解的组织,可先加蛋白酶K混匀后,55℃温浴至完全溶解。再加MS混匀,65℃温浴10min。

4   加入220 μl无水乙醇,上下颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀,将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中。12,000rpm离心1min,弃滤液。

   注:此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

5   加入500 μl去蛋白液PS。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

   注:此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质洗脱,以获得高质量基因组DNA。

6   加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

   注:漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

7   加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

8     12,000 rpm离心3min,以彻底去除纯化柱中残留的液体。

   注:此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续的酶促反应(PCR或酶切)。同时利于基因组DNA充分溶解。

9   将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处,悬空滴加30-100 μl洗脱液TE。室温放置2min。12,000 rpm离心2min,管底即为高纯度基因组DNA。

-20℃保存。

   注:洗脱液TE可用去离子水代替,但其pH需为8.0-8.5。体积视质粒拷贝数多少、用户对质粒浓度要求而定。

          对洗脱液TE 60℃预热,会提高基因组DNA的产量。

 

图2  基因组DNA电泳图

 

 

注意事项

1  应尽量使用新鲜的实验材料,确保提取的基因组DNA不被降解。不能立刻提取基因组DNA 的实验材料应尽快置于液氮或-70℃冰箱中保存并避免反复冻融。

2  使用液氮研磨组织材料时,应随时加入液氮,确保提取的基因组DNA不被降解。

3  基因组DNA需长期保存时,建议使用纯化液TE。分装后保存于-20℃或-80℃。

 

基因组DNA的浓度及纯度检测

1  基因组DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯

度。

2  DNA 应在OD260 处有显著吸收峰, OD260 值为1 相当于大约50 μg/ml 双链

DNA、40 μg/ml 单链DNA。

3  OD260/OD280 比值应为1.7–1.9,如果洗脱时不使用纯化液TE,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

 

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