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酵母基因组DNA快速提取试剂盒

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品牌: 东盛
型号: N1161/N1162
规格: 50次/100次
单价: 555.00元/盒
起订: 1 盒
供货总量: 99 盒
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 广东 广州市
有效期至: 长期有效
浏览次数: 16
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明

酵母基因组DNA快速提取试剂盒

 

 

货号

规格

价格

N1161

50次

555

N1162

100次

990

 

 

产品组分

 

组分

货号

N1161

N1162

消化缓冲液DS

15 ml

30 ml

裂解液MS

20 ml

40 ml

蛋白酶K

1 ml

2 ml

去蛋白液PS

30 ml

60 ml

漂洗液PE

15 ml

30 ml

纯化液TE

5 ml

10 ml

DNA纯化柱

 50个

 100个

说明书

1份

1份

 

注:裂解液MS中含有变性剂,请不要直接接触皮肤。

        漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

需要购买的试剂

        溶壁酶(东盛货号:N9031、N9032)。

 

保存条件

蛋白酶K于-20℃保存。

其余试剂置于室温(15-25℃)干燥条件下保存1年。

   消化缓冲液DS和裂解液MS中如有沉淀,在55℃加热溶解,待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。

 

产品说明

    本产品用于酵母基因组DNA的小量提取。纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞释放基因组DNA,由硅胶膜柱可逆吸附基因组DNA,经蛋白酶消化、漂洗液清洗

除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质后,用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品可从1-5×107的酵母细胞中提取到3-35 μg 超纯基因组

DNA(OD260/280 = 1.7-1.9)。

 

产品特点

  • 高效:一次可获得3-35 μg基因组DNA。
  • 快速:1小时内即可获得超纯的基因组DNA。
  • 安全: 整个操作中不用酚/氯仿有机物。
  • 高纯度:无须再纯化即可直接用于下游实验。

 

产品用途

  • 常规限制性酶切;
  • PCR扩增;
  • 文库构建;
  • Southern 杂交;
  • 分子标记分析。

 

质量控制

纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷基因的PCR扩增鉴定。

 

酵母基因组DNA提取流程图

图1  酵母基因组DNA纯化流程图

 

 

操作方法

1  向每只1.5 ml离心管中加入酵母细胞液1-5 ml(最多不超过5×107个细胞),12,000离心1min,尽量去除上清。

   注:菌液较多时,可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。

2  向菌体加入600 µl 1 M山梨醇溶液,200 U溶壁酶,漩涡振匀,30℃消化30min。

   注:可根据收集菌体量的不同、菌种的差异,溶壁酶比活的不同,相应调整溶壁酶的用量及消化时间。

3  5,000 rpm离心8-10min,去上清,收集沉淀。向收集到的菌体沉淀中加入200 μl消化缓冲液DS,振荡混匀。

   注:如需要去除RNA,可加入4 μl RNase A(100 mg/ml)溶液,震荡混匀,室温放置5min。

4  加入20μl蛋白酶K溶液和220μl裂解液MS,漩涡振荡器振荡混匀,直至形成均一的悬浮液。65℃温浴10min。溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的

水珠。

   注:加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀,一般65℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明酵母细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的

DNA 不纯。    

           如菌体超过1.5 ml,可适当延长温浴时间。

5   加入220 μl无水乙醇,上下颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀。将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

   注:此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

6   加入500 μl去蛋白液PS。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

   注:此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、脂质、多糖等杂质洗脱,以获得高质量基因组DNA。

7   加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

   注:漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

8   加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

9   12,000 rpm离心3min,以彻底去除纯化柱中残留的液体。

   注:此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续的酶促反应(PCR或酶切)。同时利于基因组DNA充分溶解。

10 将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处,悬空加入30-100μl洗脱液TE。室温放置2min。于12,000 rpm离心2min,管底即为高纯度基因组DNA。

    注:洗脱液TE可用去离子水代替,但其pH需为8.0-8.5。体积视质粒拷贝数多少、用户对质粒浓度要求而定。

            对洗脱液TE 60℃预热,会提高基因组DNA的产量。

 

图2  酵母基因组DNA电泳图

 

 

注意事项

1  溶壁酶需要客户另行购买(东盛货号:N9031、N9032)。

2  应尽量使用新鲜的菌体,确保提取的基因组DNA不被降解。

3  在操作步骤4中,菌体应充分悬浮,不要残留菌块,避免影响溶菌效果。

4  在操作步骤5种,加入无水乙醇后,可能会出现絮状沉淀,应将离心管内的溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中,确保基因组DNA的得率。

5  基因组DNA需长期保存时,建议使用纯化液TE。分装后保存于-20℃或-80℃。

 

基因组DNA的浓度及纯度检测

1  基因组DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。

2  DNA 应在OD260 处有显著吸收峰, OD260 值为1 相当于大约50μg/ml 双链DNA、40 μg/ml 单链DNA。

3  OD260/280比值应为1.7–1.9,如果洗脱时不使用纯化液TE,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

 

 

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