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海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒

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品牌: 东盛
型号: N1171/N1172/N1173
规格: 50次/100次/200次
单价: 485.00元/盒
起订: 1 盒
供货总量: 99 盒
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 广东 广州市
有效期至: 长期有效
浏览次数: 4
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明

海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒

 

货号

规格

价格

N1071

50次

485

N1072

100次

875

N1073

200次

1680

 

产品组分

 

组分

N1171

N1172

    N1173   

消化缓冲液DS

15 ml

30 ml

 60ml

裂解液MS

20 ml

40 ml

 80ml

蛋白酶K

1 ml

2ml

 4ml

去蛋白液PS

30 ml

60 ml

 120ml

漂洗液PE

15 ml

30 ml

 30ml×2

纯化液TE

5 ml

10 ml

 20ml

DNA纯化柱

 50个

 100个

 200个

说明书

1份

1份

 1份

 

 

 

 

 

 

  •  裂解液MS中含变性剂,请不要直接接触皮肤。
  •  漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

产品说明

本产品用于多种动物组织(新鲜或冻存)与培养细胞等样本的基因组DNA的纯化。已成功提取鱼类、虾类、贝类、蟹类等海洋动物组织基因组DNA。其纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA,由硅胶膜柱可逆吸附基因组DNA,经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质后,用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品可从不超过10 mg组织材料中提取到3-35 μg 超纯基因组DNA(OD260/OD280 = 1.7-1.9),此基因组DNA可直接用于PCR、酶切、文库构建等后续实验。

产品特点

  • 高效:一次可获得3-35μg基因组DNA。
  • 快速:30min内即可获得超纯的基因组DNA。
  • 通用:可从多种样本材料中获得基因组DNA。
  • 安全:整个操作中不用酚/氯仿有机物。
  • 高纯度:无须再纯化即可直接用于下游实验。

产品用途

  • 常规限制性酶切
  • PCR扩增
  • 文库构建
  • 分子标记分析

保存条件

蛋白酶K于-20℃保存。

其余试剂置于室温(15-25℃)干燥条件下保存1年。

如果消化缓冲液DS和MS中沉淀,可在55℃加热溶解,待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA的纯化效率。

 

操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

1  材料处理

取少量样本材料,放入液氮预冷的研钵中。快速用力研磨的同时加入少量液氮,直至样本材料被研磨成粉末。将研磨好的样本转移至1.5 ml离心管中,每管组织材料含量应不超过10 mg。

如果没有液氮,尽快将组织切小置于离心管,进入下一步。

● 每支离心管中的样本当量不宜超过10 mg。每10 mg样本材料可获得10μg基因组DNA。样本量过大,将会影响细胞核裂解效率并可能堵塞纯化柱,进而降低基因组DNA的得率与纯度。

2  加入200 μl消化缓冲液DS,漩涡振荡15 s。

● 如需去除RNA,可加入4 μl RNase A(100 mg/ml),振荡混匀,室温放置5min。

3  加入20 μl蛋白酶K,漩涡振荡混匀。简短离心以去除管盖内壁的水珠。55℃温浴至溶液变清亮(期间可适当颠倒几次,温浴后简短离心以去除管盖内壁的水

珠)。

4  加入220 μl裂解液MS充分颠倒混匀,65℃温浴10 min,简短离心以去除管盖内壁的水珠。

● 加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀,一般65℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 不纯。       

5  加入220 μl无水乙醇,上下颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀。简短离心以去除管盖内壁的水珠。将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中。12,000rpm离心1min,

弃滤液。

● 此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

6  加入500 μl去蛋白液PS。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

● 此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质,以获得高质量基因组DNA。

7  加入500μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

● 漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

8  加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

9  12,000 rpm离心3min,以彻底去除纯化柱中残留的液体。

● 此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续的酶促反应(PCR或酶切)。同时利于基因组DNA充分溶解。

10 将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处,悬空滴加30-100μl洗脱液TE。室温放置2min。 12,000 rpm离心2min,管底即为高纯度基因组DNA。-20℃保存。

● 洗脱液TE可用去离子水代替,但其pH需为8.0-8.5。

● 对洗脱液TE 60℃预热,会提高基因组DNA的产量。

 

 

 

 

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