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细胞/细菌总RNA提取试剂盒

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品牌: 东盛
型号: R1061
规格: 50次
单价: 650.00元/盒
起订: 1 盒
供货总量: 99 盒
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 广东 广州市
有效期至: 长期有效
浏览次数: 2
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明

 

细胞/细菌总RNA提取试剂盒

 

货号

规格

价格

R1061

50次

650

 

产品组分

组分

R1061(50 次)

溶液 RS

30 ml

溶液RB

50 ml

溶液 RP

30 ml

溶液 RW

12 ml

TE

1 ml×2

DEPC处理水

10 ml

溶菌酶(50 mg/ml)

500μl

RNase-free 纯化柱

50 个

RNase-free 离心管

50 个

说明书

1 份

 

需要自备的溶液

●  β-巯基乙醇

●  无水乙醇

产品说明

细胞/细菌RNA提取试剂盒是经过改进开发的新一代产品,提高了裂解液的裂解能力和提取的灵敏度,同时通过可在特定适宜的条件下特异、可逆地结合RNA,而各种蛋白质和其他杂质均可被去除掉对硅基质膜的改进增强了对RNA的吸附能力,得到的RNA 纯度更好,质量更高。该试剂盒可从各种培养细胞或菌体中快速提取总RNA,每个吸附柱每次可处理50–100 mg 组织或5×106 细胞,可同时处理大量不同样品。一个小时内即可完成反应,提取的总RNA 没有DNA 和蛋白的污染,可用于Northern blot、Dot blot、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆。

 

保存条件

溶菌酶-20℃保存,其他试剂盒组分4℃保存。

操作步骤-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

操作前在溶液 RS中加入β-巯基乙醇至终浓度为1%

第一次使用前应在溶液 RW中加入无水乙醇,加入量请参见瓶上标签。

1 收集细胞

悬浮细胞的收集(收集细胞数量请不要超过1×107):估计细胞数量, 300 ×g离心5 min,将细胞收集到离心管中,仔细吸除所有培养基上清。

单层贴壁细胞的收集(收集细胞数量请不要超过1×107):可直接在培养容器中裂解(容器直径不超过10 cm),或者使用胰蛋白酶处理后离心收集细胞沉淀。

菌体的收集(收集菌体的最大量不超过1×109):4℃ 12,000 rpm(~13,400 ×g)离心2 min收集菌体,仔细去除所有培养基上清,用含有溶菌酶的100 μlTE彻底重悬菌体,

孵育时间见下表。

 

 

TE缓冲液中溶菌酶的浓度

孵育时间(室温)

G-细菌

400 μg/ml

3-5 min

G+细菌

3 mg/ml

5-10 min

 

 

以后的所有离心步骤均在室温(20-25℃)进行。

2. 加入350 μl溶液 RS(在使用前请加入β-巯基乙醇),涡旋振荡混匀,若出现不溶性沉淀,12000 rpm(~13,400 ×g)离心2 min,将上清转移至另一离心管中。

3. 加入700 μl溶液 RB,混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入纯化柱(纯化柱+收集管)中,12,000 rpm(~13,400 ×g)离心30-60 s,倒掉废液,将纯化柱放回收集管中。

4. 向纯化柱中加入350 μl溶液 RP,12,000 rpm(~13,400 ×g)离心30-60 s,弃废液,将纯化柱放回收集管中。

5. 向纯化柱中加入500 μl 溶液 RW(使用前请先检查是否已加入乙醇),室温静置2 min,12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s,弃废液,将纯化柱放回收集管中。

6. 向纯化柱 中加入500 μl 溶液 RW,室温静置2 分钟,12,000 rpm(~13,400×g)离心30 s,弃废液,将纯化柱放回收集管中。

7. 12,000 rpm (~13,400 ×g)离心2 min,去除残余液体,将纯化柱置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

注意:此步骤目的是将纯化柱中残余的漂洗液去除,离心后将纯化柱在室温放置片刻,或置于超净工作台上通风片刻,以充分晾干。如果有漂洗液残留,可能会影响后续的

RT等实验操作。

8. 将纯化柱转入一个新的离心管中,加30–100 μl RNase-free ddH2O,室温放置2 min,12,000 rpm (~13,400 ×g)离心2 min。

注意:洗脱缓冲液体积不应少于30 μl,体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃,以防降解。

注意:如果想提高RNA得率,可重复上步操作一次,合并两次得到的溶液。

注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

●  操作前在溶液 RS中加入β-巯基乙醇至终浓度为1%,如1 ml RL 中加入10 μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的溶液 RS 4℃可放置一个月,

溶液 RS在储存时可能会形成沉淀,如果有沉淀出现,请加热溶解后使用。

●  第一次使用前应在溶液 RW中加入无水乙醇,加入量请参见瓶上标签。。

●  严防操作环境、使用的容器、耗材和试剂的RNase污染。操作过程中勤换手套。

●  使用本产品提取的RNA一般不含有DNA污染。在极少数情况下(与组织pH值等相关),如果有DNA污染而又必须去除,则可以用RNase-free的DNase处理样品。

●  请严格遵照操作步骤操作。

●  不同起始材料试剂用量及预期RNA产率。

 

细胞种类

做大用量

最大用量时RNA得率

COS

3×106

35 μg

Hela

7×106

15 μg

NIH/3T3

1×107

10 μg

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