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RT-PCR Kit(逆转录试剂盒)

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品牌: 东盛
型号: R1011/R1012
规格: 20次/100次
单价: 600.00元/盒
起订: 1 盒
供货总量: 99 盒
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 广东 广州市
有效期至: 长期有效
浏览次数: 20
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明

RT-kit(逆转录试剂盒)

货号        规格         价格

R1011      20次         600

R1012      100次       2500 

 

试剂盒组成:    

 

组分

R1011(20T)

R1012(100T)

M-MLV(200 U/μl)              

20 μl

100 μl

Rnase Ihibitor(40 U/μl)

12 μl

60 μl

Oligo(dT)15 (50 μM)

20 μl

100 μl

Random primer(50 μM)

20 μl

100 μl

5×first-strand buffer

80 μl

400 μl

Rnase-free ddH2O

1 ml

1 ml×5

dNTPs(10 mM each)

50 μl

250μl

 

 

 

产品说明

RT-PCR Kit(逆转录试剂盒)是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的、具有高灵敏度的PT-PCR反应系统。该系统合理配备了与cDNA第一链合成反应相关的各种组分,优化的体系保证了M-MLV具有高效的逆转录酶活性,所得cDNA对后续的PCR或定量PCR实验兼容性好,可用于检测稀有基因的表达、从极少数细胞中定量检测特定mRNA的表达水平、克隆特定基因的cDNA片段等。

 

适用范围

  • 第一链cDNA合成
  • cDNA文库构建
  • 一步法RT-PCR
  • 引物延伸
  • 3和5RACE

保存条件

试剂盒的各组成成分应在-20℃保存。酶在-20℃可保存1年以上,在0℃可保存3天。

 

操作步骤:

1.  在冰浴的无菌离心管中加入

     1-5 μg总RNA或250-500 ng mRNA,

     1 μl  Oligo(dt)15 或Random primer,

     补Rnase-free ddH2O至12.4 μl;

2.  进行变性退火反应

      70oC温浴5 min, 简短离心后冰浴5 min;

3.  依次加入

       4 μl        5×first-strand buffer,

       1 μl        dNTPs(10 mM each), 

       1 μl        M-MLV,

       0.6 μl     Rnase Ihibitor;

4.  按下列条件进行反转录反应

     42 oC 温浴60 min (随即引物25 oC 温浴10 min ,37 oC 温浴60 min);

5.  终止反应

     70oC 温浴5 min终止反应,置冰上进行后续实验或-20 oC 保存。

6.  用RNase-free ddH2O将反应体系稀释到50 μl,取2-5 μl进行PCR扩增反应。

 

注意事项

1  用于cDNA 合成反应的溶液试剂尽可能用DEPC 进行处理,并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时,首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后,再将溶液进行过滤

    除菌处理。

2  使用简单的RNA纯化方法即可获得满足于RT-PCR反应的RNA,但为了保证实验的成功率,建议使用GTC法(异硫氰酸胍法)制备的高纯度RNA。

3  试剂盒的各组成成分应在-20℃保存,酶制品应在实验前才从-20℃中取出,使用后也应立即放入-20℃保存。

4  为防止RNA降解,应尽量避免反复冻融,有条件的实验室最好保存于-70℃。

5  最佳的PCR反应条件,因PCR扩增仪的不同而不同,所以在使用您的样品之前最好先试做一下control反应,以确定最佳的PCR反应条件。

6  cDNA 产物应置于-20℃保存。

 

 

 

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