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TRAzol

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品牌: 东盛
型号: R1021/R1022
规格: 20次/100次
单价: 160.00元/瓶
起订: 1 瓶
供货总量: 99 瓶
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 广东 广州市
有效期至: 长期有效
浏览次数: 18
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明

TRAzol

本产品可以从动物组织、植物材料、各种微生物、培养细胞等中提取Total RNA。样品在RNAisoTM Plus中能够充分被裂解,在加入氯仿离心后,溶液会形成上清层、中间层和有机层(下层),RNA分布在上清层中,收集上清层后,经异丙醇沉淀便可以回收得到Total RNA。

 

产品组分

 

货号

规格(ml)

价格

R1021

20次

160

R1022

100次

540

 

 

 

试剂盒之外所需准备试剂

◆ 氯仿

◆ 异丙醇

◆ RNase-free75%乙醇

◆DEPC处理水(制备方法:使用RNase-free的玻璃瓶,向超纯水中加入DEPC至终浓度0. 1%(v/v),过夜搅拌后,高温高压灭菌。)(R2041/R2042)

 

产品特点

  • 经典的RNA提取方法
  • 稳定的得率
  • 高纯度产物,可用于多种下游实验

 

保存和运输

1. 可以在室温下保存,建议在2-8℃下避光保存,效果更佳。

2. 可以在常温下运输。

 

实验操作

1. TRAzol的使用量情况如下。

样品量

TRAzol使用量(ml)

10 cm2的贴壁培养细胞

1

107的悬浮培养细胞

1~2

100 μl的白细胞

2

50~100 mg的普通组织样品

1

50~100 mg的特殊组织样品(肝、脾、骨及软骨等)

2

15~30 mg的植物材料(多糖和多酚含量不高的)

1

2. 实验样品的研磨和匀浆。

A. 贴壁培养细胞

① 倒出培养液,用1×PBS清洗一次。

② 每10 cm2生长的培养细胞中加入1 ml的TRAzol,水平放置片刻,使裂解液均匀分布于细胞表面并裂解细胞,然后使用移液枪吹打细胞使其脱落(对于贴壁

   牢固的培养细胞可用细胞刮勺剥离细胞)。

③ 将内含细胞的裂解液转移至离心管中,用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。

④ 室温静置5分钟。

B. 悬浮培养细胞

① 将悬浮培养细胞连同培养液一起倒入离心管中,8,000 g 4℃离心2分钟,弃上清。

② 向每107个细胞中加入l~2 ml的TRIzol。

③ 用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。 ④ 室温静置5分钟。

C. 动物组织、植物材料样品

① 将超低温冻结的RNA提取样品称量后迅速转移至用液氮预冷的研钵中,用研杵研磨组织,其间不断加入液氮,直至研磨成粉末状(无明显的可见颗粒,如果

   没有研磨彻底会影响RNA的收率和质量)。

② 对于普通的RNA提取样品,可以向研钵中加入适量的TRAzol,将研磨成粉末状的样品完全覆盖,然后室温静置,直至样品完全融化,再用研杵继续研磨至裂

   解液呈透明状。

   对于特殊样品,如肝、脾、骨及软骨等,可以将研磨成粉末状的样品加入到含有适量的TRAzol的匀浆管中,把匀浆管置于冰浴中进行匀浆,直至匀浆液呈

   无颗粒透明状。

③ 将匀浆液转移至离心管中,室温静置5分钟。

④ 12,000 g 4℃离心5分钟。

⑤ 小心吸取上清液,移入新的离心管中(切勿吸取沉淀)。

3. Total RNA的提取。

① 向上述步骤2的匀浆裂解液中加入氯仿(TRAzol的1/5体积量),盖紧离心管盖,用力振荡(氯仿沸点低、易挥发,振荡时应小心离心管盖突然弹开)。待充分

   乳化溶液呈乳白状(无分相现象)后,再室温静置5分钟。

② 12,000 g 4℃离心15分钟。

③ 从离心机中小心取出离心管,此时匀浆液分为三层,即:无色的上清液、中间的白色蛋白层及带有颜色的下层有机相。吸取上清液转移至另一新的离心管中

   (切忌吸出白色中间层)。

④ 向上清中加入等体积的异丙醇,上下颠倒离心管充分混匀后,在15~30℃下静置10分钟。

⑤ 12,000 g 4℃离心10分钟。一般在离心后,试管底部会出现沉淀。

4. RNA沉淀的清洗。

   小心弃去上清,缓慢地沿离心管壁加入75%的乙醇l ml(切勿触及沉淀),轻轻上下颠倒洗涤离心管管壁,12,000 g 4℃离心5分钟后小心弃去乙醇(为了更好

   地控制RNA中的盐离子含量,应尽量除净乙醇)。

5. RNA的溶解。

   室温干燥沉淀2~5分钟(不可以离心或加热干燥,否则RNA将会很难溶解,有关RNA溶解可以参考Troubleshooting中的相关说明),加入适量的RNase-free

   水溶解沉淀,必要时可用移液枪轻轻吹打沉淀,待RNA沉淀完全溶解后于-80℃保存。

 

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