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流式细胞凋亡检测

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品牌: originbio
型号: 2003
规格:
单价: 面议
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 江苏 南京市
有效期至: 长期有效
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明

 实验步骤1. 细胞收集:悬浮细胞直接收集到10ml的离心管中,每样本细胞数为(1~5)×106,/mL 500~1000r/min离心5min,弃去培养液。2. 用孵育缓冲液洗涤1次,500~1000r/min离心5min。3. 用100ul的标记溶液重悬细胞,室温下避光孵育10~15min。4. 500~1000r/min离心5min沉淀细胞孵育缓冲液洗1次。5. 加入荧光(SA-FLOUS)溶液4℃下孵育20min,避光并不时振动。6. 流式细胞仪分析:流式细胞仪激发光波长用488nm,用一波长为515nm的通带滤器检测FITC荧光,另一波长大于560nm的滤器检测PI。7. 结果判断:凋亡细胞对所有用于细胞活性鉴定的染料如PI有抗染性,坏死细胞则不能。细胞膜有损伤的细胞的DNA可被PI着染产生红色荧光,而细胞膜保持完好的细胞则不会有红色荧光产生。因此,在细胞凋亡的早期PI不会着染而没有红色荧光信号。正常活细胞与此相似。在双变量流式细胞仪的散点图上,左下象限显示活细胞,为(FITC-/PI-);右上象限是非活细胞,即坏死细胞,为(FITC+/PI+);而右下象限为凋亡细胞,显现(FITC+/PI-)。

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