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中洪博元生物 shrna慢病毒

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品牌: 中洪博元生物
型号: 009
规格: 1
单价: 面议
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 广东 深圳市
有效期至: 长期有效
浏览次数: 2
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明

 简介: shrna慢病毒

提供商: 中洪博元生物

服务名称: 慢病毒包装

地区: 全国

   慢病毒包装简要步骤:

    以六孔板中的1孔为例,每个样品需要1×106个293T细胞。

      1、取1.5ml灭菌EP管,加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血清培养基。轻柔混      匀,室温孵育5min。

      2、取1.5ml灭菌EP管,取9μl 脂质体2000l溶于250μl无血清培养基中。轻柔混匀,室温孵育5min。

      3、将DNA溶液和脂质体溶液轻柔混匀。室温孵育20min

      4、用胰酶消化并记数293t细胞。用含血清的培养基重悬细胞。

      5、在六孔板中每孔,加入1ml含血清的生长培养基,再加入DNA-脂质体复合物。

      6、将1ml重悬的293T细胞(1×106个细胞/ml)加入到平板中。37℃CO2孵箱中孵育过夜。

      7、移除含有DNA-脂质体复合物的培养基移除,代之以DMEM(含丙酮酸钠和非必须氨基酸)。

      8、转染后48-72h收获含病毒的上清。3000 rpm 离心20min,去除沉淀。

      9、病毒上清-80°C贮存。

      包装出来的慢病毒对NIH/3T3细胞达90%以上感染效率。

 

      注意事项

     1.在慢病毒感染细胞前,为检测病毒上清培养液内病毒的活性,并确定病毒与转染细胞之间的比率,需要     确定病毒的滴度。病毒的滴度可以通过转染Hela细胞,然后使用抗体筛选稳定的细胞转染株,进行计数和      数值统计。

     2. 在慢病毒转染细胞的过程中最重要的一步是融合,只有一些较小的慢病毒载体才能转导进细胞,因此     ,病毒颗粒的吸附是慢病毒转染的限速步骤。.

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