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Dojindo SPiDER-β Gal 利用活细胞分析lacZ报告基因的表达

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品牌: Dojindo
型号: 343-09161
规格: 20ug x3本
单价: 面议
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 广东 广州市
有效期至: 长期有效
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明

 利用活细胞分析lacZ报告基因的表达

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SPiDER-βGal


   SPiDER-βGal是检测具有细胞膜透过性及细胞内滞留性β-galactosidase的新型试剂。SPiDER-βGal具有较高的细胞膜透过 性,因此可使用活细胞分析分析lacZ报告基因的表达。色素保留在细胞内,不会向外流出。因而,可进行单细胞层面的高灵敏度成像。


               

◆原理


  SPiDER-βGal与β-galactosidase发生反应,生成名为quinone methide(醌甲基化物)的中间体,与附近的蛋白质中的亲核基团(SH基等)结合,形成稳定的共价键,从而具备荧光性质。

  反应后的色素被固定在细胞内的蛋白质,滞留在胞内,可在单个细胞层面检测β-galactosidase表达细胞。

 

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◆特点


  ● 可使用活细胞或组织进行单个细胞层面的表达细胞荧光成像,亦可使用X-gal等固定细胞

  ● 为探测物不向外流出,使用比以往更高灵敏度的β-galactosidase的荧光探针进行检测


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                           β-galactosidase稳定细胞系HEK/lacZ 细胞(活细胞)的染色实例

                       黄色 : SPiDER-βGal    蓝色 : Hoechst 33342(※lacZ 表达细胞与未表达细胞以1 : 1比例混合)

 

 

 

◆利用SPiDER-βGal检测β-galactosidase


  SPiDER-βgal可对固定细胞及活细胞进行染色,即使染色后进行固定化,也不会对色图产生影响。



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◆固定化对染色的影响


  细胞固定化会使GFP的荧光强度下降。但是,使用SPiDER-βgal进行染色,即使是固定细胞也具有较强的荧光性。

 

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  利用GFP-lacZ 融合质粒DNA,同时表达GFP及β-galactosidase的HeLa细胞的荧光色图


◆案例分析


 

果蝇组织的Live成像


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  用10 μmol/l SPiDER-βGal 和16 μmol/l Hoechst 33342对未固定的果蝇组织染色20-30分钟,共聚焦显微镜观察。
黄色:SPiDER-βGal
蓝色:Hoechst 33342

  利用SPiDER-βGal在细胞内的高保留性,完全不会渗出到邻近细胞;只对β-galactosidase(β-半乳糖苷酶)表达细胞进行单细胞层面染色。

 


老化细胞染色实例

 

  利用H2O2老化诱导WI-38细胞的荧光显微镜及流式细胞仪分析

 

   荧光显微镜下,通过SPiDER-βGal的荧光可以清晰观察到老化诱导的活细胞中SAβ-Gal表达显著。

  ● 与其他细胞老化标记相关的结果

  ● 流式细胞仪中,可以通过SPiDER-βGal荧光强度的变化来确认老化诱导的SAβ-Gal表达的增加。(右图)

 

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产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 产品价格
343-09161 SPiDER-βGal 20μg×3 - -
 

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