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普林斯顿DNA测序Centri •Sep Columns

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品牌: 普林斯顿
型号: CS-900
规格: 32 Pack
单价: 面议
发货期限: 自买家付款之日起 15 天内发货
所在地: 广东 深圳市
有效期至: 长期有效
浏览次数: 135
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明

 Centri •Sep Columns

使用CENTRI-SEP离心柱可以快速、有效地将大分子(蛋白质、核酸、碳水化合物复合物等)从小分子(核苷酸、缓冲液盐分等)中纯化出来。柱子基于 Sambrook 等。 描述而设计,即用凝胶过滤法将缺刻平移反应中的DNA纯化。纯化装置是由一个特殊的多孔微型离心管、干胶、清洗管和样品收集管组成,所有的设计都是以纯化为目的。
   该凝胶可以极好地回收大于16碱基对或25-mer的DNA片断,并去除高于98%的盐分、核苷酸混合物和其它 低分子量化合物。
    使用试剂级水或合适的缓冲液水化离心柱,在微量离心管或吊桶式离心管中离心,去除液体。然后,将样品加到凝胶柱上,再次离心,进行样品处理。通过去除低分子量的化合物而使样品纯化,再使用选择的缓冲液将纯化的蛋白交换出来。
      1、当用ABI 373A 和 377A进行DNA测序时的荧光素反应混合物的纯化。
      2、去除下列反应DNA/RNA中游离的标记dNTP’s:
           z 缺刻平移
           z 末端标记反应
           z 聚合反应
      3、在多种限制性消化反应中,脱盐、去除痕量酚或交换缓冲液中的盐分。
      4、蛋白的纯化与脱盐。
     对于一些通用技术如酚/氯仿抽提和乙醇沉淀等,这些离心柱的使用具有方便、快速、无毒等优良特性。
      z 迅速有效的分离
      z 不需预选择缓冲液
      z 室温条件下,离心柱稳定
      z 方便 20-100µl样品的纯化
     
离心注意事项:
  
   z 使用水平式转子或吊桶式转子可以得到最高的产量。然而,固定角转子微量离心也可以得到满意的结果,并且省时。
   z 对于可变速微量离心,不要使用按压式按钮,因为转速会超过设定而使转子以最大的离心力运行。


在这里:
rpm = 每分钟转
RCF= 相对离心力
r = 半径,是从转杆中心到转子桶底部的距离


质量控制:对每一批CENTRI-SEP离心柱的分离效率都经过检测,保证精确性。
  
材料供给:
   z CENTRI-SEP离心柱包括干胶
   z 清洗管(2ml)
   z 样品收集管(1.5ml)
  
推荐附加材料:
   z 微量离心机(Eppendorf 5415C,可
     变速或等速)
   z 可调移液器(Pipetman 100 µl)
   z 移液Tips(枪头)
   z 球状移液管(Dispo, 2ml乳胶)
   z 微量离心管架
   z 振荡器
  
常见问题:
   1. 离心柱水化之后没有将间隙液体除净。
   2. 在纯化样品过程中触摸了离心柱。这两种操作错误都会导致无效的分离。
  
解决方法:
   1. 如果注意到某一离心柱在第一次离心后所释放出来的液体比其他的少,则再短暂离心一次,通常可除净多余的液体。
   2. 将样品直接点在凝胶床的中心,不要让样品接触离心柱的壁。
   (1)Reference: Sambrook, J., Fritsch. E.F., and Maniatis, T., Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold
   Spring Harbor Laboratory. 1989.
订货信息:

   

 目录号  规格
 CS-900  32Pack
 CS-901  100Pack

 

测序前的染料终止子的去除
由 Applied Biosystems 有限公司推荐的 CENTRI-SEP 离心柱可以将已完成的 DNA 测序反应中过量的DyeDeoxy™ 终止子高效、可靠地去除。下列方法可与 Taq DyeDeoxy™ 和 ABI Prism™终止循环测序试剂盒联合使用,还可与 AmpliTaq®, FS等联合使用,用 ABI 373A or 377A 测序仪读取。
  
 1. 水化离心柱
   1.1 轻轻敲打柱子以保证干胶沉淀到离心柱底部。
   1.2 打开离心柱顶端的盖子,加入0.80 ml试剂级水或缓冲液使干胶吸胀。调整离心柱底部的塞子使其处于合适的位置以便离心柱可以自己站立。再盖上盖子,摇动、倒转、或短时震荡使干胶水化。干胶完全水化是非常重要的。
   1.3 在使用之前,离心柱需要在室温条件下水化至少30 分钟。水化后的离心柱于 4°C可以冷藏几天。补充10 mM 叠氮化钠可以储存更长时间。在继续使用之前,需将离心柱恢复到室温。
  
 2. 去除缝隙液体
   2.1 倒转或短促敲打离心柱,使凝胶乳浆化,并尽量
       使其保持水平状,清除离心柱凝胶中的气泡,然后将离心柱放在微量试管架上使胶沉淀。
   2.2 当凝胶已经沉淀无气泡后,打开离心柱的顶盖,去掉底部的塞子。
   2.3 将离心柱中过量的液体在清洗管(2ml)中控干。如果液体没有通过离心柱的末端立刻流出来,则使用一只2ml的乳胶头吸管,在柱子的顶端给予一定的空气压力,迫使液体开始流过离心柱过滤器。在液体流完之后,离心柱将自动停止。大约200-250µl的液体从离心柱中流出,弃掉液体。
   2.4 在可变速离心机上以750g 将离心柱和清洗管一起离心2分钟,以便去除缝隙中的液体。例如:使用Eppendorf 5415C型微量离心管,在750g(7.3cm转子)的离心速度为3,000rpm。如果使用固定角微量离心机, 一定要在离心柱中使用定位标记模,以便追踪离心柱的位置。
   2.5 除去大约300µl液体,如果离心柱末端还有一小滴液体,用纸吸掉。弃去清洗管和间隙液体。不要使凝胶过分干燥。即刻进行样品处理。
  
 3. 样品处理
   3.1 将离心柱置于明亮处,在凝胶顶端加入20µl 已完成DyeDeoxy™终止子反应的混合物,仔细地将样品直接地加入到凝胶床顶端的中心位置,不要搅动凝胶的表面(见图1)。不要用反应混合物或样品吸管的头触及离心柱的侧壁,因为这会降低纯化的效率,以及由于过量的染料使实验失败。
   3.2 将离心柱放入样品收集管(1.5ml)后,置于转子中,保持固有的离心柱方向。柱子中凝胶介质的最高点应该总是朝向转子的外侧(见图1)。在750 ⋅ g离心柱子和收集管 2 分钟。纯化的样品将被收集在样品收集管的底部。弃去离心柱,使用ABI样品制备方法继续处理样品。
  3.3 真空离心干燥样品,不要使用加热法。
 
 

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