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Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶

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品牌: YEASEN
型号: 10615ES76
规格: 500U
单价: 面议
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 上海
有效期至: 长期有效
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产品详细说明

 产品信息

产品名称

产品编号

规格

储存

价格(元)

Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶

10615ES76

500 U

-20

1256.00

Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶

10615ES84

2000 U

-20

3856.00

Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶

10615ES92

10000 U

-20

14856.00

产品描述

真核生物中mRNA经转录后修饰5形成一个特殊结构,即帽子结构,该结构对mRNA的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶,其由D1D12两个亚基组成,兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性,可将7-甲基鸟嘌呤帽结构(m7Gppp)连接到RNA5末端m7Gppp5N。牛痘病毒加帽酶,在合适浓度的加帽缓冲液Capping buffer鸟苷三磷酸(GTPS-腺苷甲硫氨酸(SAM等存在条件下,能够在一个小时之内对RNA进行加帽,效率可达到100%并且保证正确的方向。

本品以无菌液体形式提供可应用于体内/外翻译前mRNA的加帽反应或mRNA5末端标记反应

产品性质

来源(Source

携带牛痘病毒加帽酶基因的E. coli

最适温度(Optimum Temperature

37℃

储存缓冲液(Storage Buffer

20 mM Tris-HCl pH 8.0100 mM NaCl1 mM DTT0.1 mM EDTA0.1% Triton X-10050%甘油

活性单位定义(Unit Definition

37℃条件下,1小时内将10 pmol GTPα- 32 P)掺入到一条含80个核苷酸80 nt转录产物上所需要的酶量

运输和保存方法

冰袋运输,-20℃保存,有效期1年。

注意事项

1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作

2)所提取的RNA需经过纯化并使用无核酸酶的水重悬

3)在加入酶之前需要对RNA溶液进行加热以去除5末端的二级结构

4对于已知5末端结构RNA,可以延长反应时间至60分钟,提高加帽效率

55末端标记反应体系中,GTP储液应稀释为反应体系中mRNA摩尔浓度的1-3倍。

使用方法

1. 加帽反应

本步骤适用于10 μg RNA≥ 100 nt)的加帽反应,且可根据实验需要放大。

110 μg RNA1.5 mL离心管,使用核酸酶的水稀释至15 μL

265加热5分钟

3取出离心管置于冰上5分钟;

4依次加入以下组分:

组分

体积

上述变性的RNA

15 μL

10×Capping Buffer

2.0 μL

GTP10 mM

1.0 μL

SAM2 mM

1.0 μL

Vaccinia Capping Enzyme10 U/μL

1.0 μL

【注】:10×Capping Buffer配方为:0.5 M Tris-HClpH 8.050 mM KCl10 mM MgCl210 mM DTT

537°C孵育30分钟;

6RNA加帽完成,可进行后续实验。

25末端标记反应

步骤适用于5末端带有三磷酸的RNA标记,且可根据实验需要放大,其标记效率受反应体系中RNAGTP摩尔浓度比以及RNA样本中GTP含量影响。

1取适量RNA1.5 mL离心管,使用核酸酶的水稀释至14 μL

265加热5分钟

3)取出离心管置于冰上5分钟;

4依次加入以下组分:

组分

体积

上述变性的RNA

14 μL

10×Capping Buffer

2.0 μL

GTP mix

2.0 μL

SAM2 mM

1.0 μL

Vaccinia Capping Enzyme10 U/μL

1.0 μL

【注】:GTP mixGTP和少量标记物,其中GTP使用浓度参照注意事项5)。

537°C孵育30分钟;

6RNA 5末端标记完成可进行后续实验

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